Антиоксидантные свойства аминокислот и образование долгоживущих радикалов белка под действием рентгеновского излучения

  • автор:
  • специальность ВАК РФ: 03.00.02
  • научная степень: Кандидатская
  • год, место защиты: 2008, Пущино
  • количество страниц: 107 с. : ил.
  • бесплатно скачать автореферат
  • стоимость: 240,00 руб.
  • нашли дешевле: сделаем скидку
  • формат: PDF + TXT (текстовый слой)
pdftxt

действует скидка от количества
2 диссертации по 223 руб.
3, 4 диссертации по 216 руб.
5, 6 диссертаций по 204 руб.
7 и более диссертаций по 192 руб.
Титульный лист Антиоксидантные свойства аминокислот и образование долгоживущих радикалов белка под действием рентгеновского излучения
Оглавление Антиоксидантные свойства аминокислот и образование долгоживущих радикалов белка под действием рентгеновского излучения
Содержание Антиоксидантные свойства аминокислот и образование долгоживущих радикалов белка под действием рентгеновского излучения
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Активные формы кислорода, окислительный стресс и 6 антиоксидантная защита клетки
1.1. Активные формы кислорода (АФК)
1.2. Роль АФК в развитии окислительного стресса и его биомаркеры
1.3. Антиоксидантная защита клетки
Глава 2. Роль белков и аминокислот в окислительновосстановительном
балансе клетки
2.1. Свободнорадпкальное окисление белков
2.2. Способность аминокислот к нейтрализации последствий
окислительного стресса
Глава 3. Долгоживущие белковые радикалы
ЧАСТЬ II. МЕТОДИЧЕСКАЯ
Глава 4. Материалы и методы исследования
4.1. Материалы
4.2. Методы
4.2.1. Воздействие ионизирующего излучения и тепла
4.2.2. Определение концентрации ДНК
4.2.3. Очистка моноклональных антител из асцитной жидкости
4.2.4. Имму но ферментный анализ (ИФА)
4.2.5. Определение продукции перекиси водорода
4.2.6. Определение продукции ОН-радикалов
4.2.7 Тест на выживание
4.2.8. Микроядерный тест
4.2.9. Измерение собственной хемилюминесценции растворов аминокислот 51 и яичного альбумина
ЧАСТЬ III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 5. Влияние аминокислот на образование АФК в водных
растворах in vitro при воздействии ионизирующего излучения и 52 тепла
5.1. Влияние аминокислот на образование АФК в водных растворах in
vitro при воздействии ионизирующего излучения
5.2. Влияние аминокислот на образование АФК в водных растворах in
vitro при тепловом воздействии
5.3. Радиозащитные свойства аминокислот
5.4. Влияние аминокислот на образование окислительных повреждений (8-оксогуанина) в ДНК под действием рентгеновского излучения
Глава 6. Образование долгоживущих радикалов белков и
аминокислот при воздействии рентгеновского излучения
6.1. Образование ДЖРБ в растворах яичного альбумина и метионина
6.2. Генотоксическос действие ДЖРБ
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
Приложение 1
Приложение 2
Одним из наиболее значимых повреждающих факторов среды действующих на биологические макромолекулы, являются активные формы кислорода (АФК). Такие формы кислорода индуцируются разнообразными физическими, химическими и биологическими факторами: УФ и ионизирующим излучением, присутствием химических мутагенов и канцерогенов, а также естественным и, особенно, нарушенным аэробным клеточным метаболизмом. Недавно было показано, что тепловое воздействие приводит к образованию АФК в водных растворах [Брусков и др., 2002, 2003]. Высокая реакционная способность АФК при определенных условиях делает их чрезвычайно токсичными для биологических систем на всех уровнях организации - молекулярного, клеточного и организменного.
Повышение уровня АФК сверх предела, обусловленного антиоксидантной защитой, приводит биологические системы в состояние “окислительного стресса”, которое сопровождается перекисным окислением липидов, мутагенными изменениями ДНК, модификациями белков и приводит к различным патологическим процессам [Зенков и др., 2001]. Повреждающее действие АФК сопровождает развитие многих заболеваний (в том числе нейродегенеративных, воспалительных, инфекционных, аутоиммунных и др.). АФК играют важную роль в процессах старения, мутагенеза, канцерогенеза и тератогенеза [Меньшикова и др., 1994; Cerutti, 1994; Beal, 1995; Beckman, Ames, 1998; Parman et al., 1999; Moskovitz et al., 2002]. С другой стороны, определенный физиологический уровень АФК играет важную регуляторную роль, участвуя в качестве специфических сигнальных молекул (вторичных мессенджеров) в регуляции метаболических процессов, экспрессии генов, работы иммунной, эндокринной и других физиологических систем [Дубинина, 2001; Voeikov, 2001; Гольдштейн, 2002; Droge, 2002].
Во всех живых организмах существуют системы антиокислительной защиты клеток от избыточного уровня АФК, представленные специализированными ферментами и низкомолекулярными антиоксидантами [Зенков и др., 2001]. Однако, антиоксидантные свойства широко распространенных биологических соединений в настоящее время изучены недостаточно. Наприме, лишь недавно установлено, что среди природных рибонуклеозидов гуанозин и инозин обладают ярко выраженными антиоксидантными и радиозащитными свойствами [Gudkov et al., 2006].
Одним из важнейших классов низкомолекулярных органических веществ в биологических системах являются L-аминокислоты. В настоящее время антиоксидантные свойства этих веществ и их роль в физико-химических процессах, сопутствующих
снижения концентрации перекиси. “Счетный раствор” готовился непосредственно перед измерением. Чувствительность метода позволяет опеределять Н2О2 в концентрации <1нМ. При определении концентрации Н2О2 использовались значения измерений не менее трех образцов, по которым определяли среднее значение и среднеквадратичное отклонение.
4.2.6. Определение продукции ОН-радикалов
Осуществляли с помощью реакции с кумарин-3-карбоновой кислотой (ККК), продукт гидроксилирования которой - 7-гидроксикумарин-З-карбоновая кислота (7-ОН-ККК) -является удобным флуоресцентным зондом для определения образования этих радикалов [Черников, Брусков, 2002]. В раствор ККК в воде (0.5 мМ, pH 3.6) вносили 0,2 М фосфатного буфера (pH 7.4), далее добавляли аминокислоты (1мМ). Опытные и контрольные образцы подвергали воздействию рентгеновского излучения или прогревали. Флуоресценцию продукта реакции ККК с гидроксильным радикалом - 7-ОН-ККК, измеряли в тех же пробах на спектрофлуориметре SFM 25А (Kontron Instruments, Италия) с 7.« = 400 нм, Хет = 450 нм в кварцевой зеркальной кювете. Калибровку производили с помощью коммерческой 7-ОН-ККК.
4.2.7 Тест па выживание
Тестировали на выживаемость самцов мышей Kv:SHK массой 28-31 г и возрастом 10 недель. Мышам вводили внутрибрюшинно аминокислоты, растворенные в 0,14 М растворе хлорида натрия. Иньецировали по 0,5 мл на мышь, через 15 мин, после облучения, повышая концентрацию аминокислот в крови в 15 раз. Облучение осуществлялось на рентгеновской установке РУТ-15 (СССР), при комнатной температуре, мощность дозы 1Гр/мин. Впоследствии учет погибших животных проводили один раз в сутки. Контролем служила группа мышей инъецированных изотоническим раствором.
4.2.8. Микроядерпый тест
Оценивали цитогенетическое повреждение клеток по появлению полихроматофильных эритроцитов (ПХЭ), содержащих микроядра (МЯ). Животных кормили облученным обезжиренным творогом, контроль получал облученную пищу, выдержанную двое суток при 0°С. Мышей умерщвляли методом цервикальной дислокации через 28 ч после начала кормления, поскольку максимальный выход ПХЭ с МЯ наблюдается примерно через сутки после воздействия ионизирующей радиации. Гистологические препараты готовили и окрашивали по стандартной методике [Schmid, 1975] с модифицированным

Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

Рекомендуемые диссертации данного раздела