Биокатализаторы на основе метилотрофных бактерий и выделенных из них ферментов как распознающие элементы амперометрических биосенсоров

  • автор:
  • специальность ВАК РФ: 03.01.06
  • научная степень: Кандидатская
  • год, место защиты: 2013, Москва
  • количество страниц: 136 с. : ил.
  • бесплатно скачать автореферат
  • стоимость: 240,00 руб.
  • нашли дешевле: сделаем скидку
  • формат: PDF
pdf

действует скидка от количества
2 диссертации по 223 руб.
3, 4 диссертации по 216 руб.
5, 6 диссертаций по 204 руб.
7 и более диссертаций по 192 руб.
Титульный лист Биокатализаторы на основе метилотрофных бактерий и выделенных из них ферментов как распознающие элементы амперометрических биосенсоров
Оглавление Биокатализаторы на основе метилотрофных бактерий и выделенных из них ферментов как распознающие элементы амперометрических биосенсоров
Содержание Биокатализаторы на основе метилотрофных бактерий и выделенных из них ферментов как распознающие элементы амперометрических биосенсоров
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1Л. Метилотрофия и биотехнология
1.1.2.Особенности метаболизма метилобактерий
1.1.3.Биотехнологический потенциал метилобактерий
1.2. Метанолдегидрогеназа - ключевой фермент метаболизма метилобактерий
1.2.1. Характеристика МДГ
1.2.2. Структура МДГ
1.2.3. Механизм действия МДГ
1.2.4. Пути переноса электронов и протонов от МДГ
1.3. Амперометрические медиаторные биосенсоры
1.3.1. Биосенсоры на основе клеток микроорганизмов
1.3.2.Биосенсоры на основе Р()С>-дегидрогеназ
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Бактериальные штаммы
2.2. Условия культивирования
2.3. Изучение роста метилобактерий
2.4. Электрохимические измерения
2.4.1. Кислородный биосенсор
2.4.2. Медиаторный биосенсор
2.5.Выделение и очистка МДГ МеІІіуІоЬасІегіит пойиіат
2.5.1. Разрушение клеток ультразвуком
2.5.2. Фракционирование сульфатом аммония
2.5.3. Анионообменная хроматография
2.5.4. Хроматография на геле гидроксиапатита
2.5.5. Ультрафильтрация и замена буфера
2.5.6. Катионообменная ВЭЖХ
2.6. Характеристика МДГ
2.6.1. Определение активности
2.6.2. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.6.3. Определение молекулярной массы белков
2.6.4.Определение изоэлектрической точки р!
2.7. Газовая хроматография
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Физиология роста метилобактерий
3.1.1. Динамика роста метилобактерий
3.1.2. Характеристика физиологических параметров роста метилобактерий
3.1.3. Потребление метанола в динамике роста метилобактерий
3.2. Окисление субстратов метилобактериями в аэробных условиях
3.2.1.Спектр окисляемых субстратов клетками метилобактерий в аэробных условиях..
3.2.2. Мониторинг дыхательной активности метилобактерий при хранении
3.2.3. Определение параметров сенсора на основе метилобактерий
3.3. Окисление субстратов клетками и ферментными фракциями метилобактерий в присутствии медиаторов электронного транспорта
3.3.1. Определение активности метилобактерий на разных фазах роста
3.3.2. Эффективность медиаторов электронного транспорта в процессе биоэлектрохимического окисления метанола клетками метилобактерий
3.3.3. Биоэлектрохимическое окисление субстратов клетками и ферментными фракциями метилобактерий в присутствии ферроцена
3.3.3.1. Селективность медиаторных сенсоров на основе метилобактерий
3.3.3.3. Долговременная стабильность сенсоров
3.3.3.4. Калибровочные зависимости медиаторных сенсоров на формальдегид
3.3.4.5. Аналитические и метрологические характеристики медиаторных сенсоров на основе клеток и ферментных фракций метилобактерий
3.4.0чистка и характеристика МДГ Methylobacterium nodulans
3.4.1. Очистка МДГ Mb. nodulans
3.4.2. Характеристика МДГ Mb.nodulans
3.4.2.1. Выбор оптимальных условий хранения МДГ Mb. nodulans
3.4.2.2. Изучение температурной и pH-стабильности МДГ Mb. nodulans
3.4.2.3. Зависимость активности МДГ от pH и температуры
3.4.2.4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность МДГ Mb. nodulans..
3.4.2.5. Субстратная специфичность МДГ Mb. nodulans
3.5. МДГ Mb. nodulans как биокатализатор амперометрического медиаторного биосенсора
3.5.1. Иммобилизация МДГ Mb. nodulans на поверхности графито-пастового электрода.

3.5.2.Зависимость ответов медиаторного МДГ-сенсора от природы буферного раствора и pH среды
3.5.3. Стабильность медиаторного сенсора на основе иммобилизованной МДГ Mb. nodulans
3.5.4. Определение содержания метанола с помощью медиаторного сенсора на основе иммобилизованной МДГ Mb. nodulans
3.6. Сравнительный анализ характеристик медиаторных биосенсоров
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А540 - оптическая плотность при длине волны 540 нм
РСЮ - пирролохинолинхинон
ЗОБ - додецилсульфат натрия
АО - алкогольоксидаза
ВПК - биологическое потребление кислорода
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография
ГА - гидроксиапатит
ГЖХ - газо-жидкостная хроматография
ДЭАЭ - диэтиламиноэтил
ДББХ -2,5-дибром-1,4-бензохинон
ДТТ - дитиотрейтол
ДХФИФ - 2,6-дихлорфенолиндофенол
КОЕ - колониеобразующие единицы
КФБ - калий фосфатный буферный раствор
МДГ - метанолдегидрогеназа
МЭС - 2-(ЪГ-морфолино)этансульфоновая кислота
НАД(Ф)+ - никотинамидадениндинуклеотид(фосфат), окисленный
НАД(Ф)Н - никотинамидадениндинуклеотид(фосфат), восстановленный
РБФ - рибулозо-1,6-бисфосфат
РМФ - рибулозомонофосфат
Трис - трис[гидроксиметил]аминометан
ПААГ - полиакриламидный гель
ПВП - поливинилпирролидон
ПЭИ - полиэтиленимин
ПХМБ - п-хлормеркурибензоат
ФА- формальдегид
ФАД - флавинадениндинуклеотид
ФАДГ - формальдегидцегидрогеназа
ФМС - феназинметосульфат
ФЦ - ферроцен
ФЭС - феназинэтосульфат
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

1 2 3 4 5
Gluconobacter induslrius п-бензохинон гп Глюкоза 0,01 - 2 мМ (Ikeda et al., 1992; Takayama et al., 1993)
Gluconobacter suboxydans Кз [Fe(CN)6] гп Этанол 0,1 - 1 мМ (Ikeda et al., 1992)
Pseudomonas 74-111 Тетраметил-1,4-бензохинон К Фенол 0,01 - 1 мМ (Skladal et al., 2002)
Pseudomonas 83-IV 1.1’-диметил-ферроцен 0,001 - 1 мМ
Pseudomonas 394 (p20) ФЦ 0,01 - 1 мМ
Pseudomonas putida - 8-40 мкМ (Kirgoz et al., 2006)
гп Фенол Глюкоза 0,5^1 мМ 0,05-2мМ (Timur et al., 2007a)
3 Катехол Глюкоза 0,025-0,2мМ 1-7,5 мМ (Timur et al., 2007b)
СП гп 2,4-дихлор-феноксиуксу сная кислота 20-80 мкМ (Odaci et al., 2009b)
Pseudomonas fluorescens п-бензохинон гп Никотиновая кислота 0,5 - 5 мМ (Takayama et al., 1995)
Кз [Fe(CN)6] г Глюкоза 1-5 мМ (Odaci and Timur 2011)
г Г люкоза 0,2-1 мМ (Tuncagil et al. 2009b)
ФЦ гп Г люкоза 60-750 мкМ (Yeni et al., 2008)
Pseudomonas putida JS444 гп Параоксон Паратион Паратион- метил До 2 мкМ (Lei et al., 2005)
гп Фенитротион Этил-п- нитрофенол- тиобензил- фосфат До 5 мкМ (Lei et al., 2007)
Hansenula anomala К3 [Fe(CN)6]; Метиленовый зеленый гп L-лактат До 0,4 мМ (Oungpipat et al., 1995)
Hansenula polymorpha Кз [Fe(CN)6] г L-лактат До 1,6 мМ (Smutok et al., 2007)
E. coli СУ Фенол 1,6-16 ppm (Neufeld et al., 2006)
Moraxella sp. гп п- нитрофенол До 20 мкМ (Mulchan-dani et al., 2005)
СУ ß-d- глюкурони- даза 0,2 нг/л - 2 мкг/л (Togo et al., 2007)

Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

Рекомендуемые диссертации данного раздела