Ферменты липоксигеназного каскада : структурная характеристика, каталитические свойства, молекулярная эволюция

  • автор:
  • специальность ВАК РФ: 03.01.05
  • научная степень: Докторская
  • год, место защиты: 2013, Казань
  • количество страниц: 346 с. : ил. + Прил. (с. 143-346: ил.)
  • бесплатно скачать автореферат
  • стоимость: 240,00 руб.
  • нашли дешевле: сделаем скидку
  • формат: PDF + WORD
pdfdoc

действует скидка от количества
2 диссертации по 223 руб.
3, 4 диссертации по 216 руб.
5, 6 диссертаций по 204 руб.
7 и более диссертаций по 192 руб.
Титульный лист Ферменты липоксигеназного каскада : структурная характеристика, каталитические свойства, молекулярная эволюция
Оглавление Ферменты липоксигеназного каскада : структурная характеристика, каталитические свойства, молекулярная эволюция
Содержание Ферменты липоксигеназного каскада : структурная характеристика, каталитические свойства, молекулярная эволюция
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

ЧАСТЬ І
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Л. Оксилипины как биологически активные соединения
1.2. Метаболизм оксилипинов
1.3. Общая характеристика липоксигеназ
1.4. Специфичность действия липоксигеназ
1.5. Модели специфичности действия липоксигеназ
1.6. Третичная структура липоксигеназ
1.7. Липоксигеназа-3 кукурузы (ХтЕОХЗ)
1.8. Общая характеристика ферментов Р450
1.9. Общая характеристика ферментов семейства СУР74
1.10. Структурная организация ферментов семейства СУР74
1.11. Алленоксидсинтазы
1.12. Гидропероксидлиазы
1.13. Дивинилэфирсинтазы
1.14. Эпоксиалкогольсинтазы
1.15. Сравнение механизмов катализа цитохромов СУР74
и монооксигеназ Р450
1.16. Локализация ферментов СУР74
1.17. Регуляция экспрессии генов ферментов липоксигеназного
каскада
1.18. Молекулярная эволюция ферментов липоксигеназного каскада
1.18.1. Общие представления о молекулярной эволюции
1.18.2. Классификация и молекулярная филогения липоксигеназ
1.18.3. Классификация цитохромов семейства СУР74
1.18.4. Ферменты семейства СУР74 вне царства растений

1.18.5. Молекулярная филогения ферментов CYP74
1.19. Постановка цели
исследования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы биоинформатики
2.2. Подготовка растительного материала
2.3. Выделение тотальной РНК из листьев растений
2.4. Реакция обратной транскрипции и получение
двуцепочечной кДНК
2.5. Полимеразная цепная реакция
2.6. Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот
в агарозном геле
2.7. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.8. Молекулярное клонирование ДНК
2.8.1. Характеристика бактериальных штаммов
2.8.2. Среды для культивирования бактерий
2.8.3. Приготовление компетентных клеток E
2.8.4. Перенос плазмид в компетентные клетки E
2.8.5. Клонирование ПЦР-фрагментов
2.8.6. Клонирование полноразмерных кДНК
2.8.7. Клонирование целевых генов в экспрессирующие векторы
2.9. Сайт-направленный мутагенез клонированных генов
2.10. Наработка и очистка рекомбинантных белков
2.10.1. Выращивание культур продуцентов и индукция синтеза рекомбинантных белков
2.10.2. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном
геле
2.10.3. Выделение и очистка рекомбинантных белков
2.11. Реактивы и материалы для исследований катализа рекомбинантных ферментов

2.12. Получение препаратов из растительного материала и подготовка субстратов
2.12.1. Получение препаратов ацетонового порошка семян
2.12.2. Получение препаратов свободных жирных кислот
2.12.3. Получение препаратов гидроперекисей жирных кислот
2.13. Кинетические исследования реакций липоксигеназного
каскада
2.14. Анализ продуктов реакций липоксигеназного каскада методами высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
2.14.1. Хроматография на обращенной фазе
2.14.2. Хроматография на нормальной фазе
2.15. Спектральные исследования
2.15.1. Подготовка образцов для ГХ-МС
2.15.2. Проведение экспериментов по ГХ-МС
2.15.3. Получение спектров оптического поглощения
2.15.4. Получение ЯМР-спектров
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение рекомбинантного фермента 2тЬОХЗ
3.1.1. Экспрессия ХтЬОХЗ в бактериальном продуценте
3.1.2. Очистка рекомбинантного фермента ХшЬОХЗ
3.2. Окисление линолевой и линоленовой кислот при участии
ZmLOXЗ и ОтЬОХ1
3.3. Участие (78)-гидроперекиси 16:3 в липоксигеназном пути
3.4. Направленная модификация первичной структуры ЯгпЬОХЗ
3.4.1. Создание мутантных форм ЯтЬОХЗ
3.4.2. Окисление линолевой кислоты мутантными формами
гтЬОХЗ
3.4.3. Окисление сложных липидов 2тЬОХЗ и 2тЬОХЗА1а56201у
3.5. Моделирование механизма ферментативного действия ХтЬОХЗ
3.5.1. Трехмерная модель ХтЬОХЗ

Липоксигеназа полученная из липидных телец огурца проявляла необычную активность при окислении арахидоновой кислоты. При этом образовывались (155г)-гидроперокси-(5 Z, 8Z, 11Z, 1 ЗЕ)-э йкозатетераеновая
кислота и (85)-rHflponepoKCH-(5Z,9£,l lZ,14Z)-3fiK03aTeTepaeH0Baa кислота в соотношении 4:2. При связывании с липидными каплями, активность липоксигеназы увеличивалась более чем в 4 раза и изменялась позиционная специфичность; среди продуктов реакции преобладала (85)-гидроперокси-(5Z,9£,1lZ,14Z)-3ftK03aTeTepaeH0Baa кислота [Feussner, Kuhn, 1995].
Липоксигеназа выделенная из плодов томата предпочитала в качестве субстрата линолевую, но не линоленовую, арахидоновую, 11,14-эйкозадиеновую и 11,14,17-эйкозатриеновую кислоты. При этом линолевая кислота преобразовывалась ферментом до (95)-гидроперокси-( 1 OE, 12Z)-октадекадиеновой, арахидоновая кислота - до смеси (5S)-, (11 S')- и (8S)-гидроперекисей [Regdel et al., 1994]. При окислении арахидоновой кислоты при участии (12/?)-ЛОГ красной водоросли Gracilariopsis lemaneiformis сначала синтезировалась (125)-rHflponepoKCH-(5Z,8Z, 1 OE, 14Д)-эйкозатетраеновая
кислота, которая далее преобразовывалась в (12/?, 135*)-дигидрокси-эйкозатетраеновую кислоту [Hamberg, Gerwick, 1993]. Окисление проходило исключительно по (п-2) типу при участии разных пентадиеновых фрагментов арахидоновой кислоты.
Таким образом, окисление жирных кислот при участии липоксигеназ происходит, в основном, по одному и тому же типу, в то время как позиция углерода прохирального центра пентадиеновой группы, от которой происходит удаление водорода на первом этапе липоксигеназной реакции, может различаться.
Достаточно много исследований было посвящено влиянию положения пентадиенового фрагмента относительно углеродной цепи жирной кислоты и дополнительных группировок, связанных с метальной и карбоксильной группами. В ряде экспериментов использовались дикарбоновые жирные кислоты с разным количеством и положением двойных связей, а также
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

Рекомендуемые диссертации данного раздела