Анализ роли малой ГТФ-азы RАВ7 в эндоцитозе рецептора эпидермального фактора роста

  • автор:
  • специальность ВАК РФ: 03.00.25
  • научная степень: Кандидатская
  • год, место защиты: 1998, Санкт-Петербург
  • количество страниц: 150 с.
  • автореферат: нет
  • стоимость: 240,00 руб.
  • нашли дешевле: сделаем скидку
  • формат: PDF + TXT (текстовый слой)
pdftxt

действует скидка от количества
2 диссертации по 223 руб.
3, 4 диссертации по 216 руб.
5, 6 диссертаций по 204 руб.
7 и более диссертаций по 192 руб.
Титульный лист Анализ роли малой ГТФ-азы RАВ7 в эндоцитозе рецептора эпидермального фактора роста
Оглавление Анализ роли малой ГТФ-азы RАВ7 в эндоцитозе рецептора эпидермального фактора роста
Содержание Анализ роли малой ГТФ-азы RАВ7 в эндоцитозе рецептора эпидермального фактора роста
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

ОГЛАВЛЕНИЕ.
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Эпидермальный фактор роста и его рецептор
2.2. Внутриклеточный везикулярный транспорт
2.3. Типы эндоцитоза
2.4. Рецептор-опосредованный эндоцитоз ЭФР
2.5. Основные молекулярные реакции, определяющие процесс везикулярного транспорта
2.6. Механизмы регуляции везикулярного транспорта
2.7. Регуляция эндоцитоза РаЬ-белками
2.8. Участие цитоскелета в регуляции эндоцитоза
2.9. Модели эндоцитозного транспорта,
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Культивирование клеток
3.2. Получение иодированного ЭФР
3.3. Исследование динамики эндоцитоза в условиях предварительного связывания лиганда
3.4. Исследование динамики эндоцитоза в условиях "импульсной" загрузки лигандов
3.5. Обработка клеток нокодазолом и циклогексимидом
3.6. Антитела
3.7. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
3.8. Иммунопреципитация
3.9. Электрофорез
3.10. Иммуноблоттинг
3.11. Субклеточное фракционирование

4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Динамика компартментализации 1251-ЭФР в клетках с нормальным и мутантными рецепторами ЭФР
4.2. Морфологический анализ эндоцитоза нормального и мутантных рецепторов ЭФР
4.3. Локализация РаЬ7 в клетках с нормальным и мутантными рецепторами ЭФР
4.4. Динамика эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов
в условиях разрушения тубулинового цитоскелета
4.5. ИаЬ7 в условиях деполимеризации микротрубочек
4.6. Идентификация внутриклеточных структур, ассоциированных с РаЬ7
4.7. Ассоциация РаЬ7 с ранними/сортирующими эндосомами
4.8. Анализ ассоциации ИаЬ7 с цитоскелетными структурами
4.9. Перераспределение ИаЬ7 в условиях деполимеризации микротрубочек
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. ВВЕДЕНИЕ.
Эпидермальный фактор роста (ЭФР) поступает в клетки посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза (Willingham, Pastan, 1981). Схематично этот процесс можно представить следующим образом: после связывания лиганда с рецептором ЭФР-рецепторные комплексы интернализуются и попадают в ранние периферические эндосомы, где происходит их сортировка: часть комплексов рециклирует обратно на
плазматическую мембрану, а остальные попадают в околоядерные поздние эндосомы, после чего деградируют в лизосомах (Beguinot et al., 1984: Sorkin et al., 1988).
Хотя механизм сортировки точно неизвестен, существуют предположения, что он связан с переходом ЭФР-рецепторных комплексов с внешней мембраны эндосом во внутренние пузырьки, что приводит к образованию так называемых мультивезикулярных тел - структур, весьма характерных для поздних стадий эндоцитоза (Miller et al., 1986). При этом на ранних этапах рецептор остается достаточно долгое время экспонирован в цитоплазму своим С-концевым участком, который содержит активированный тирозинкиназный домен и сайты автофосфорилирования, и способен взаимодействовать с различными внутриклеточными субстратами. Таким образом, изменяя скорость сортировки рецепторного белка (а, следовательно, и уровень его рециклирования), клетка может изменять эффективность и длительность сигнала, идущего с активированного рецептора ЭФР, находящегося в ранних эндосомах. Поэтому механизмы, регулирующие сортировку, вызывают наибольший интерес. Именно сортировка является стадией, лимитирующей скорость доставки рецепторов в

было показано в нашей лаборатории, деполимеризация тубулина в клетках А431 не влияла на динамику поступления ЭФР-рецепторных комплексов в поздние эндосомы, при этом наблюдалось незначительное (около 30%) ингибирование деградации ЭФР. Это еще раз подчеркивает необходимость аккуратного подхода к построению общих схем, используя данные, полученные при исследовании одной системы. Таким образом, можно говорить либо о существовании независимых систем регуляции РОЭ и жидкофазного микропиноцитоза, либо о различном участии по-крайней мере микротрубочек в регуляции этих процессов. Последнее предположение кажется нам более вероятным, так как существование принципиально различных систем регуляции для схожих во многом процессов, представляется необоснованным.
К настоящему времени накоплены данные, свидетельствующие о возможном взаимодействии РаЬ7 с микротрубочками. Было показано, что микроинъекция в клетку ИаЬ7 приводила к быстрому превращению ранних эндосом в поздние, а после обработки клеток нокодазолом (агентом, деполимеризующим микротрубочки) этот процесс блокировался более чем на 90% (МикЬорасЛзуау е! а1„ 1997). Однако исследования, проведенные другой группой авторов, продемонстрировали иной характер действия нокодазола на функцию РаЬ7. Эти исследователи показали, что в контрольных клетках ИаЬ7 ко-локализуется с тубулином, а после обработки клеток нокодазолом наблюдается ко-локализация РаЬ7 с лизосомами (Мегеээе е1 а1., 1995). Авторы предположили, что 13аЬ7 локализуется на лизосомах, а стимуляция эндоцитоза ведет к перераспределению его на ранние и поздние эндосомы. Таким образом, разрушение микротрубочек ведет к
Вы всегда можете написать нам и мы предоставим оригиналы страниц диссертации для ознакомления

Рекомендуемые диссертации данного раздела