Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae

  • Автор:
  • Специальность ВАК РФ: 03.00.22
  • Научная степень: Кандидатская
  • Год защиты: 1984
  • Место защиты: Харьков
  • Количество страниц: 144 c. : ил
  • Стоимость: 250 руб.
Титульный лист Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae
Оглавление Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae
Содержание Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae
Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Перспективность применения микроорганизмов
в защите растений от вредных насекомых
1.2. Биологические свойства энтомопатогенных бактерий Bacillus thuringiensis Berliner
1.3. Методы сохранения микроорганизмов
1.4. Влияние охлаждения и условий замораживания
на микробные клетки
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ПАСТЬ
Глава 2. Материалы и методы исследований
Глава 3. Влияние возраста культуры, концентрации клеток
и среды суспендирования на выживаемость Вас. thuringiensis suhsp.galleriae при действии
замораживания-оттаивания
Глава 4. Влияние криопротекторов и длительности консервации в жидком азоте на выживаемость и пролиферативную активность бацилл
Глава 5. Сохранность морфокультуральных, физиолого-био-химических, антигенных и инсектицидных свойств Вас.thuringiensis suhsp.galleriae после
криоконсервации
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ
ЛИТЕРАТУРА
В настоящее время в связи с интенсивным развитием микробиологической промышленности в научно-исследовательской работе и в производстве постоянно возникает необходимость сохранения активности биопрепаратов.
В решениях ХШ съезда КПСС и в Продовольственной программе СССР намечены крупные меры по созданию новых эффективных средств защиты растений от вредителей, болезней и сорняков, регуляторов роста и других препаратов для сельского хозяйства. Предусматривается значительное увеличение выпуска микробиологических средств защиты растений. Микробиологическая промышленность нашей страны выпускает ряд бактериальных и грибных препаратов против насекомых - вредителей сельского и лесного хозяйств. Среди них наибольшее распространение получили инсектицидные препараты на основе бактерий группы Bacillus thuringien-sis . Ценность этих микроорганизмов заключается в способности образовывать целый ряд метаболитов, токсичных для вредителей растений, кровососущих насекомых и безвредных для человека, животных, растений, насекошх-опылителей. Однако, .масштабы производства и использования инсектицидных препаратов на основе кристаллообразующих бацилл пока не достаточны для эффективной борьбы с вредителями.
Требуют доработки чрезвычайно важные вопросы стабилизации инсектицидных свойств исходных штаммов, так как использование традиционных методов поддержания (периодические пересевы, хранение под маслом, высушивание) в ряде случаев не обеспечивает их
сохранение.
В последнее время в нашей стране и за рубежом для хранения культур широко применяются лиофильное высушивание и замораживание. Эти методы консервирования позволяют длительное время сохранять жизнеспособность и функциональную активность микроорганизмов. Вместе с тем известно, что у лиофилизирован-ных культур гораздо чаще, чем у замороженных, наблюдаются генетические и морфологические изменения, повреждения ферментных систем, ДНК, нарушения проницаемости клеточных мембран. Поэтому замораживание по сравнению с лиофильным высушиванием является более надежным методом хранения микробных культур. Однако, при использовании низких температур для целей консервации возникает необходимость защиты клеток от их губительного действия. Разработка эффективных способов защиты биологических объектов от действия низких температур связана как с выявлением повреждающих факторов, так и с изучением механизмов их действия.
В доступной нам литературе отсутствуют систематические исследования ПО изучению вопросов УСТОЙЧИВОСТИ Вас. -Ышг1.П£1еп-э1з к воздействию замораживания-оттаивания, сохранности биологических свойств этих культур в условиях низких температур, что затрудняет понимание механизмов криоповреждений клеток и ограничивает использование метода низкотемпературной консервации для хранения штаммов кристаллообразугощих бацилл.
Целью нашей работы была разработка и научное обоснование метода консервации ВасЛЦш?1пЕ1епэ1а в жидком азоте на основании изучения жизнеспособности, морфокультуральных, биохимических, инсектицидных свойств бацилл цри действии различных условий замораживания-оттаивания и в процессе криоконсервации.
Как было показано выше /179, 231/, для определения криоустойчивости микроорганизмов явно недостаточно использование одного режима замораживания-оттаивания. Поэтому в дальнейшей серии экспериментов при изучении криорезистентности бацилл использовались различные режимы замораживания и оттаивания. Эксперименты проводились с вегетативным и споровыми формами, суспендированным в физиологическом растворе и в дистиллированной воде при концентрации 1-5 х 10® клеток (спор)/ мл.
Показано, что на выживаемость вегетативных клеток значительное влияние оказывают скорость замораживания, скорость размораживания и присутствие соли в среде суспендирования. Влияние этих факторов проявлялось следующим образом. При медленном отогреве проб (90°С/мин), замороженных в физиологическом растворе со скоростями 5, 40 и 400°С/мин, выживало минимальное количество клеток - 9,6 + 1,12%; 12,4 + 1,12%; 18,2+. 1,6% соответственно (рис.6). В пробах, замороженных при тех же скоростях охлаждения, но отогретых е более высокими скоростями (170, 360 и 550°С/мин), количество выживших бактерий с возрастанием скорости охлаждения и скорости размораживания увеличивалось. Максимальная выживаемость вегетативных клеток - 38,8+
+ 2,17% наблюдалась в пробах, замороженных со скоростью •400°С/мин и отогретых со скоростью 360°С/мин. В дистиллированной воде при аналогичных условиях замораживания-оттаивания выживало, в среднем, на 40% бацилл больше (рис. 7).
При скорости замораживания 400°С/мин на выживаемость бацилл оказывала влияние скорость отогрева. Так, с увеличением скорости отогрева от 170 до 550°С/мин выживаемость возросла от 65,6 до 80%.

Рекомендуемые диссертации данного раздела