Uersinia pestis EV как индуктор синтеза цитокинов, регулирующих кооперативное взаимодействие поли- и мононуклеарных фагоцитов в процессе формирования противочумного иммунитета

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА	1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.	Цитакины:	биологические эффекты и их значение

I.E.	Цитокинопосредованкая регуляция кооперативного

взаимодействия макрофагов и нейтрофшюв

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1.	Бактериальные штаммы

2.2.	Экспериментальные животные

Е.Я.	Клеточные	линии

2.4.	Получение	цитокинсодержащих супернатантов

2.4.1. Получение супернатантов, содержащих комплекс моно-кинов, синтезируемых суммарным пулом макрофагов перитонеального экссудата морских свинок

2.4.2.	Получение супернатантов, содержащих комплекс моко-

кинов, синтезированных субпопуляциями макрофагов морских свинок

2.4.3.	Выявление монокинов в супернатантах продуцирующих

их клеток иммуноферментным методом

2.5.	Изучение изменений функциональной активности нейт-

рофилов при воздействии комплекса монокинов

2.5.1. Получение нейтрофшюв

2.5.2. Определение фагоцитарной активности нейтрофшюв

E.5.3. Оценка экспрессии Fo-рецепторов на поверхности НеЙТрОФИЛОЕ

2.5.4. Характеристика активности лизооом нейтрофилов.

2.5.5. Определение хемотактической активности нейтрофилов

2.6. Получение супернатантов, содержащих комплекс нейт-рофилокинов

2.7. Изучение изменений функциональной активности макрофагов при воздействии нейтрофилокиноодержащих супернатантов

2.7.1. Определение фагоцитарной активности макрофагов

2.7.2. Оценка экспрессии Fc-рецепторов на поверхности макрофагов

2.7.3. Определение миграции макрофагов

2.7.4. Характеристика активности лизооом макрофагов

2.7.5. Определение индекса исчезновения макрофагов

2.7.6. Определение показателя макрофагальной трансформации МОНОЦИТОВ

2-* 7.7, Определение индекса перераспределения субпопуляций перитонеальных макрофагов,

2.8. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3, ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМПЛЕКСА МОНОКИНОВ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ИНТАКТНЫХ И ИММУННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

3.1. Исследование влияния монокинсодержащих супернатантов на Фагоцитарную активность нейтрофилов

3.1.1, Исследование влияния монокинсодержащих супернатантов,. полученных в разные сроки от начала стимуля-



ции макрофагов, на фагоцитарную активность кейтро-филов

3,1,3.	Сравнительная характеристика регулирующего действия монокинов на фагоцитов чумного микроба при первичном и вторичном иммунном	ответе,

3.2. Изучение влияния монокинсодержащих супернатантов

на хемогактичеокую активность нейтрофилов

3.3. Исследование действия монокинов на экспрессию

5с-рецепторов на поверхности нейтрофилов

3.4. Оценка влияния монокинов на лабилиаацию лизооомных мембран нейтрофилов

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ГЕТЕРОГЕННОСТИ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ ПО ИХ СПОСОБНОСТИ ОСУЩЕСТВЛЯТЬ ДИСТАНТНУЮ РЕГУЛЯЦИЮ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ,

4.1. Характеристика гетерогенности субпопуляций перитонеальных макрофагов по их способности синтезировать монокины, модулирующие фагоцитарную активность нейтрофилов

4.2. Исследование гетерогенности субпопуляций перитонеальных макрофагов по их способности осуществлять дистантную регуляцию хемотаксиса нейтрофилов

4.3. Характеристика гетерогенности субпопуляций перитонеальных макрофагов по их способности продуцировать монокины, регулирующие экспрессию Рс-рецепторов на поверхности нейтрофилов



Цитокинпродуцирующая активность Нф стала изучаться только в последнее десятилетие. К настоящему времени установлено, что активированные Нф способны синтезировать и продуцировать молекулы с активностями, подобными имеющимся у уже известных цитокинов -ИЛ-1,	ИЛ-3,	ИЛ-8, ФНО-ос, Г-КСФ (Tiku M.L. et al., 1986; Ulich

T.R. et al.,	1987; Djeu	Y. et al., 1990; Hirohito K. et al, 1991;

Zeman K.,	1993; Kuhns D.B., Sailin J.I.,	1995). Эти цитокины,

синтезируемые Нф, участвуют в кооперативном взаимодействии клеток фагоцитарной системы, действуя как паракринно (на Мф), так и ау~ токринно (на Нф) (Kuhns D.B., Gallin J.I., 1995). Индукторами их синтеза	могут быть как экзогенные факторы, например, микроорганизмы,	вызывающие "раннюю волну" их продукции, так и эндогенные,

в частности,	цитокины,	опосредующие "позднюю волну" (Потапнев

М.П.,	1995;	Lindemann	A. et al., 1988; Lloyd A., Oppenheim J

1992).	Наиболее изученным является ИЛ-1 нейтрофильного происхождения,	который, по мнению Goto F. et al. (1984-1988), является

M-lß,	так как имеет сходство с человеческим ИЛ-Iß по физико-хи-

мическим свойствам, специфической активности и МЫ£-концевой последовательности аминокислот (Goto F. et al, 1988). Вместе с тем, имеются данные о продукции Нф и ИЛ-lot (Geh K. et al., 1989). В индукции ИЛ-1-подобной активности Нф ведущая роль принадлежит окислительному стрессу при "респираторном взрыве". Этот нейтро-фильный цитокин стимулирует функциональную активность клеток СМФ, проявляющуюся увеличением их хемотаксиса, адгезии, хемилюминес-ценции, активности лизосомальных ферментов, фагоцитарной активности (Зурочка A.B., 1992; Canning P.C., Heill J.D., 1989).

Наряду с известными цитокинами Нф продуцируют ряд низкомолекулярных пептидов, характерных только для этих клеток и участвующих в кооперации Мф и Нф. Японские исследователи показали, что