Определение азотистых летучих оснований и гистамина в биологических объектах

СОДЕРЖАНИЕ
Введение
1 Литературный обзор
1.1 Анализ показателей качества биологических объектов
на примере рыбы и рыбопродуктов.
1.2. Определение нелетучих аминов.
1.3. Методы определения гистамина.
1.3.1. Определение гистамина в различных биологических объектах 
1.3.2. Определение гистамина в рыбе и рыбопродуктах.
1.3.2.1. Фотометрические методы анализа.
1.3.2.2. ВЭЖХопределение гистамина.
1.3.2.3. Использование флуоресцентных методов для определения гистамина
1.3.2.4. Газохроматографическое определение гистамина.
1.3.2.5. Ферментативный метод определения гистамина.
1.3.2.6. ТСХопределение гистамина в рыбе.
1.4. Определение АЛО в рыбе и продуктах ее переработки
1.4.1. Пробоподготовка при анализе рыбы и рыбопродуктов
на содержание АЛО
1.4.2. Газохроматографические методы определения АЛО
1.4.3. Фотометрическое определение азотистых летучих оснований
1.4.4 Проточноинжекционный метод определения гриметиламина 
1.4.5. Ферментативные методы определения триметиламина
1.4.6. Титримстрические методы определения АЛО
1.4.7. Другие методы определения азотистых летучих оснований
1.5 Анализ литературных данных и постановка задач исследований
2 Экспериментальная часть и обсуждение результатов
2.1 Используемые реактивы и оборудование
2.2 Определение условий экстракции гистамина
2.3 Подбор оптимальных условий хроматографирования
2.3.1 Неподвижная фаза  пластинка Силу фол.
2.3.2 Выбор подвижной фазы
2.3.3 Выбор проявителя и режимов хроматографирования
2.4 Работа с модельными смесями гистамина и гистидина.
2.5 Работа с образцами рыбы.
2.5.1 Выбор оптимальной пробоподготовки.
2.5.2 Хроматографирование образцов рыбы.
2.6. Обработка результатов анализа гистамина методом ТСХ
2.7 Построение градуировочного графика для определения
гистамина методом ТСХ.
2.8 Определение содержания гистамина в рыбе.
2.9 Использование стандартного метода определения гистамина
в качестве метода сравнения.
2. Методика определения гистамина методом ТСХ в рыбной продукции.
2. Разработка методики определения гистамина с использованием хроматографических пластинок Сорбфил
2.Л Выбор условий хроматографмрования
2Л 1.2 Определение гистамина в образцах рыбы
2Л 1.3 Методика определения гистамина с использованием
хроматографических пластинок Сорбфил
2Л2 Влияние консервантов на накопление гистамина в рыбе.
2Л 3 Обоснование процесса выделения азотистых летучих оснований 
2Л4 Определение азотистых летучих оснований методом косвенной
рНпотенциометрии.
2Л4Л Выбор концентрации реагента
2Л 4.2 Приготовление и анализ модельных растворов АЛО.
2Л 4.3 Определение АЛО в рыбе.
2. Разработка методики ГЖХопределения триметиламина
в биологических объектах
21 Обоснование выбора хроматографической колонки
22 Подбор условий хроматографирования.
23 Оптимизация процесса разделения азотистых летучих оснований 
24 Определение метиламинов
Список литературы


По содержанию ТМА мгкг рыбу характеризуют, как СИ5  свежая, 5  промежуточная средняя степень свежести, свыше  рыба, не пригодная для употребления в пищу . Установлено также, что увеличение содержания азота ТМА на ранних стадиях хранения указывает на значительную порчу продукта. Кроме того, наблюдается повышенное начальное содержание азота АЛО и ТМА в рыбе, пойманной сетями в летний период. В этих случаях, оценка химического анализа не всегда согласуется с органолептическим тестом на свежесть . Таким образом, очевидно, что вопрос об использовании содержания азота АЛО и ТМА в качестве показателей свежести рыбы не имеет однозначного решения. Содержание только лишь азота АЛО не может дать всесторонней информации о качестве морской продукции. Биогенный амин гистамин 3имидазол45этиламин образуется из аминокислоты гистидина при бактериальном декарбоксилировании. Наряду с ним, при разложении белков образуется ряд других нелетучих аминов. Накопление биогенных аминов в пищевых продуктах, обусловленное декарбоксилированием аминокислот, приводит к разного рода пищевым отравлениям. Гистамин является хорошо известным токсичным веществом, вызывающим определенную реакцию организма на его повышенное содержание . Другие биогенные амины, такие как кадаверин и тирамин, усиливают токсическое действие гистамина. Показателем качества рыбы является содержание в ней путресцина, кадаверина, гистамина, а также следовых количеств спермидина и спермина . Ритчи и Макий  отмечают значительное накопление в макрели и сельди гистамина, кадаверина и путресцина при хранении рыбы. Группой японских ученых изучалось содержание таких аминов, как путресцин, кадаверин, тирамин, триптамин, спермидин, спермин в свежей рыбе . Отмечено, что при хранении содержание спермина уменьшается, спермидина  остается постоянным, а путресцина, кадаверина и тирамина  значительно возрастает. Наиболее оптимальным показателем недоброкачественности мяса сардины является содержание кадаверина. Из вышесказанного следует, что нелетучие амины являются индикатором свежести рыбы. Их накопление свидетельствует о процессах разложения, происходящих при хранении рыбной продукции. Определение содержания этих веществ помогает сделать вывод о пригодности рыбы к потреблению. Флуориметрический анализ, основанный на переводе аминов в устойчивое и интенсивно флуоресцирующее соединение при помощи подходящего реагента, например, дансилхлорида. Газохроматографическое определение полиаминов путресцин, кадаверин, тирамин, триптамин, спермидин, спермин с предварительной дериватизацией их в этилоксикарбонилпроизводные при помощи этилхлорформиата. Радиоиммуноанализ для определения аминов в пищевых образцах до сих пор не применялся. Однако при своем развитии, этот метод может стать простым и легко адаптируемым к пищевой промышленности. ТСХ определение восьми биогенных аминов в рыбе . Для разделения веществ использовали двумерное хроматорафирование. Амины определяли в виде их дансилированных производных. Следует отметить, что биологические методы определения аминов весьма трудоемки и практически не используются. Спектрофотометрический метод имеет ряд недостатков, обусловленных неизбирательностью метода . Радиоиммуноанализ требует наличия жидкостного сцинтилляционного счетчика, что является затруднительным для большинства лабораторий. Официальный метод  с использованием флуориметра довольно длительный . Наиболее современными методами можно назвать ВЭЖХ, и энзимоизотопный анализ. Эти методы имеют ряд преимуществ по точности и воспроизводимости. Однако их существенным недостатком является высокая стоимость оборудования, что препятствует их массовому распространению, а также достаточно высокие требования к квалификации операторов. Метод тонкослойной хроматографии может считаться наиболее оптимальным для пищевых лабораторий . Его преимуществами является быстрота, недорогое оборудование и простота исполнения. К тому же, при автоматизации обработки данных, метод может давать вполне удовлетворительные результаты по точности и воспроизводимости.