Иммунохимические методы определения высоко- и низкомолекулярных лекарственных соединений

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ
Иммунохимические методы определения физиологически активных соединений
Особенности определения высокомолекулярных и низкомолекулярных антигенов
Методы иммуноанализа некоторых высокомолекулярных соединений
Методы иммуноанализа, основанные на преципитации и агглютинации белков Иммуноферментное определение белков Элеюрохимические методы определения высокомолекулярных соединений с использованием иммунологических взаимодействий
Современные варианты био и иммуносенсоров для определения белков
Методы иммуноанализа некоторых низкомолекулярных соединений
Особенности определения пестицидов, лекарственных и наркотических препаратов
Метод поляризации флуоресценции для определения низкомолекулярных соединений
Некоторые аспекты определения отдельных лекарственных соединений
Свойства рибонуклеаз и методы их определения Рибонуклеазы и их свойства Методы определения рибонуклеаз Свойства сульфаниламидных соединений и методы определения сульфонамидов
Действие и метаболизм сульфонамидов в организме
Методы определения сульфонамидов Специфичность иммуноанализа Группоспецифичный иммуноанализ сульфонамидных препаратов
Постановка задачи, приборы, реактивы, объекты исследования
и условия эксперимента
Постановка задачи
Материалы и оборудование
Условия и методика эксперимента
Синтез иммуногенов, конъюгатов, определение их состава Проведение поляризационного флуоресцентного иммуноанализа синтез трейссров, тестирование поликлональных антисывороток Определение аналитических характеристик Иммунохимическое определение рибонуклеаз Выбор условий регистрации токов на планарных платиновых электродах
Неконкурентный иммуноанализ РНК аз с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора Иммобилизация биореагентов на поверхности платиновых электродов
Условия функционирования иммуноферментного сенсора Оценка возможности применения ИФС для определения рибонуклеаз
Разработка способа определения рибонуклеазы А Определение рибонуклеазы i ii Конкурентный иммуноанализ рибонуклеазы А с использованием ферментной метки Синтез конъюгата РНКазаХЭ и определение его состава Определение удельной активности ХЭ в конъюгате с РНКазой
3.4.
3.4.2. ГЛАВА 
4.2.
ГЛАВА 5 5.1.
5.1.2. 5.2.
5.2.2.
5.2.3. 5.3.
Проведение конкурентного иммуноанализа РНКазы Аналитические возможности определения РНКазы в некоторых объектах
Определение РНКазы в лекарственных формах
Определение РНКазы в сыворотке крови
Иммуноферментный анализ сульфаметазина с помощью
амперометрического иммуносенсора
Получение и характеристика конъюгатов гаптенбелок и
антителафермент
Определение сульфаметазина в формате конкурентного имму ноанал иза
Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ сульфонамидов
Определение индивидуальных сульфонамидов на примере
сульфаметазина с помощью антисыворотки, специфичной к
группе нескольких сульфонамидов
Выбор условий проведения ПФИА
Специфичность иммуноанализа
Определение отдельных сульфонамидов на примере
сульфадиазина с помощью антисыворотки с индивидуальной
специфичностью
Выбор условий определения сульфадиазина структура трейсеров и их связывание с антителами Использование гомологичных и гетерологичных трейсеров в различных вариантах иммуноанализа Специфичность антисыворотки против сульфадиазина Аналитические возможности определения сульфонамидов с помощью антител, специфических к группе структурно подобных соединений
Применение антител, полученных на синтетический аналог
сульфонамидов Ысульфанил4аминобутановую кислоту
5.3.1.1. Сравнение подходов в дизайне гаптснов для получения
 иммуногенов 
5.3.1.2. Выбор антисывороток в зависимости от природы белка
иммуногена и количества циклов иммунизации для иммуноанализа 
5.3.1.3. Оценка специфичности антител 
5.3.2. Применение смеси поликлональных антител аналитические
характеристики и специфичность 
 5.4. Определение сульфонамидов в объектах 
5.4.1. Определение сульфаметазина в таблетках и природной воде 
5.4.2. Определение сульфаниламида в молоке 
ВЫВОДЫ 
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Параметры аналитических систем для определения индивидуальных соединений или группы родственных соединений. Апробация работы. Всероссийской конференции, посвященной 0летию со дня рождения академика И. П. Алимарина Аналитика России Москва, . Публикации По теме диссертации опубликовано 8 работ. Из них 2 статьи в международном и отечественном рецензируемых научных журналах и 6 тезисов щ докладов на Всероссийских и международных конференциях. Научный консультант по вопросам электрохимии биологически активных соединений д. МАНВШ, академик РАЕН Г. К. Будников, научный консультант по вопросам, связанным с методом поляризации флуоресценции к. С.А. Еремин. ГЛАВА 1. Иммунохнмнческие методы анализа основаны на специфическом связывании определяемого соединения с соответствующими антителами, за счет чего возможно получение уникального по своей специфичности отклика. Сферы применения принципов специфического взаимодействия антиген антитело и методов на их основе весьма разнообразны. Они используются в биологии, ветеринарии, медицине и мониторинге окружающей среды от фундаментальных молекулярнобиологических исследований до медикогенетического консультирования и множества других практических процедур, осуществляемых медиками, экологами, растениеводами, животноводами и др. Наиболее перспективными являются исследования в области прикладной иммунологии, направленные на разработку высокочувствительных и специфичных селективных методов идентификации и количественного определения физиологически активных соединений. Иммуноанапитические системы, основанные на использовании иммунологического взаимодействия, способствуют также решению отдельных фундаментальных проблем клинической, фармацевтической и биологической химии, например, определение взаимосвязи структуры соединения и его биологической активности, влияние соединения на биохимические функции организма, исследование фармакокинетики, биоэквивалентности и биодоступности соединений, особенно новых синтезированных соединений. Объектами иммунохимического анализа могут быть самые различные по природе и строению вещества от простых неорганических, алифатических и ароматических соединений до сложных природных высокомолекулярных, гетероциклических веществ и их синтетических аналогов. К низкомолекулярным физиологически активным анэлитам относятся разнообразные органические вещества с молекулярной массой до Да 1. С практической точки зрения важными являются лекарственные вещества, стероида ые и пептидные гормоны, пестициды, продукты промышленного ф органического синтеза и их метаболиты. Методы иммуноанализа подразделяются на гомогенные и гетерогенные. Прямое определение концентрации антигена и антител, а также иммунного комплекса, как правило, представляет определенные трудности и не всегда оказывается возможным. Поэтому для детектирования используют специфические соединения конъюгаты или трейсеры, содержащие метки ферментные, флуоресцентные, элеюрохимические, реже изотопные, по которым могут легко детектироваться. Ф уровне пикомолярных концентраций 3. Основные свойства ферментов и способы регистрации их каталитической активности в методах иммуноанализа представлены в работе 3. На сегодняшний день разработано большое многообразие конкурентных методов, различающихся по характеру используемых иммунореагентов и или последовательности отдельных стадий. Наиболее распространенными алгоритмами проведения конкурентного иммуноанализа стали следующие гетерогенные варианты, приведены на схеме рис. Конкурентные варианты иммуноанализа низкомолекулярных аналитов с использованием ферментной метки чаще всего используются в формате ЕГЛвА со спектрометрическим или электрохимическим детектированием 9,. Неконкурентные методы также достаточно разнообразны. В присутствие эффекторов фермента возможно изменение его каталитической активности в зависимости от количества эффектора, обычно в сторону уменьшения. Это свойство может быть использовано для разработки неконкурентного иммуноанализа низкомолекулярных соединений. Ф описаны в обзорах .