Потенциометрия в исследовании антиоксидантной активности биологических объектов

ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Литературный обзор.
1.1. Активные формы кислорода и их двойственная роль в организме 
1.2. Ангиоксидантная защита организма.
1.3. Роль окислительного стресса в патогенезе различных заболеваний 
1.3.1. Болезни системы кровообращения и сахарный диабет.
1.3.2. Нарушения репродуктивной функции мужчин
1.3.3. Нарушения репродуктивной функции женщин
1.4. Мониторинг оксидантантиоксидантного состояния окислительного стресса организма
1.4.1. Определение радикальной активности.
1.4.2. Определение продуктов перекисного окисления макромолекул 
1.4.3. Оценка антиоксидантной активности
1.4.3.1. Методы определения антиоксидантной активности ферментов 
1.4.3.2. Методы определения суммарной активности неферментативных антиоксидантов 
1.5. Постановка задачи
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1. Аппаратура.
2.2. Реактивы.
2.3. Объекты исследования. 
2.4. Методы исследования
2.4.1. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности с использованием медиаторной системы.
2.4.2. Спектрофотометрический метод определения антиоксидантной активности x.
2.4.3. Гемиглобиицианидный метод определения содержания гемоглобина
2.4.4. Метод определения гематокрита.
2.4.5. Спермиологический анализ
Глава 3. Исследование взаимодействия медиаторной системы с цельной кровью и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями и разработка алгоритмов определения АОА этих жидкостей потенциометрическим методом с медиаторной системой.
3.1. Выбор сенсора.
3.2. Исследование и анализ крови и ее фракций
3.2.1. Исследование растворов индивидуальных антиоксидантов и раствора, моделирующего состав плазмы крови.
3.2.2. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы
3.2.3. Исследование влияния способа подготовки крови и ее фракций на результаты анализа
3.2.4. Выделение клеточной составляющей антиоксидантной активности крови и эритроцитарной массы
3.3. Исследование и анализ семенной и фолликулярной жидкостей
3.3.1. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы
3.3.2. Выбор фракции и способа подготовки семенной жидкости к анализу 
3.3.3. Выбор способа подготовки фолликулярной жидкости к анализу.
3.3.4. Корреляция результатов определения АОА фолликулярной жидкости и сыворотки крови.
Глава 4. Исследование взаимодействия медиаторной системы с пероксидными радикалами и разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием радикального инициатора 2,2азобис2метилпропионамидин дигидрохлорида ААРН 
4.1. Исследование реакции взаимодействия пероксидных радикалов с восстановленным компонентом медиаторной системы
4.2. Разработка метода исследования кинетики генерирования пероксидных радикалов, определение скорости и константы генерирования
4.3. Разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием реакции генерирования радикалов инициатором ААРН
4.4. Определение АОА растворов индивидуальных антиоксидантов потенциометрическим методом с использованием взаимодействия с
пероксидными радикалами, генерируемыми ААРН.
Глава 5. Сравнительные исследования антиоксидантных свойств биологических жидкостей методами, включающим стадию генерирования свободных радикалов и не включающим указанную реакцию. Обоснование использования последнего метода в анализе.
5.1. Сравнительные определения ЛОЛ плазмы крови спектрофотометрическим методом x и потенциометрическим методом с медиаторной системой
5.2. Определение образцов эритроцигарной массы потенциометрическим методом с медиаторной системой с использованием взаимодействия с радикалами ААРН и без использования радикальных
взаимодействий
Глава 6. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности в клинических исследованиях.
6.1. Исследование АОА плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа.
6.2. Исследование АОА семенной жидкости при различных видах патологии
репродуктивной функции, установление диагностических критериев 
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


С использованием потенциометрического метода с медиаторной системой определены скорость генерирования пероксидных радикалов, константа генерирования. Метод использован в клинических исследованиях. Высокая степень корреляции результатов антиоксидантной активности с наличием патологического состояния позволяет использовать данный параметр в медицинской практике. Доступность и простота приборного оформления позволяет использовать потенциометрический метод для масштабных медицинских исследований. Результаты исследования взаимодействия медиаторной системы К3РеСЫС1РеСЫб с индивидуальными антиоксидантами, цельной кровыо и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями и алгоритмы определения АОА этих жидкостей потенциометрическим методом с медиаторной системой. Методики определения антиоксидантной активности крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей. Новый потенциометрический метод с медиаторной системой для исследования радикальных реакций. Новый метод потенциометрической оценки антиоксидантной активности с использованием взаимодействия пероксидных радикалов с исследуемым объектом. Результаты корреляционных исследований плазмы крови предложенным и спектрофотометрическим методом x. Результаты корреляционных исследований индивидуальных антиоксидантов и образцов эритроцитарной массы потенциометрическим методом с использованием радикальных реакций и без ее использования. Результаты исследования антиоксидантной активности плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа. Результаты исследования антиоксидантной активности семенной жидкости при различных видах патологии репродуктивной функции. Апробация работы. Международном конгрессе Репродуктивное здоровье населения Урала и Сибири Екатеринбург, , II Международном форуме Аналитика и аналитики Воронеж, , Всероссийской конференции молодых ученых и III школы им. Н.М. Эммануэля Окисление, окислительный стресс, антиоксиданты Москва, , i i ii ii i vi ii i , , , XV i i I, i, , III Всероссийской конференции с международным участием Аналитика России Туапсе, , Съезд аналитиков России Москва пансионат Клязьма, . Публикации. По материалам диссертации опубликованы 1 статья в издании, рекомендованном ВАК, 1 глава в книге и тезисы докладов. Автор выражает благодарность доценту Уральского государственного технического университета УПИ, к. Ивановой за обсуждение результатов к. I Алешиной за помощь в экспериментальной работе профессору Института химической физики им. Семенова РАН, д. О.Т. Касаикиной за ценные советы и полезные обсуждения директору ЗАО Центр семейной медицины, к. И.Г. Портнову и руководителю лаборатории клинической эмбриологии, врачуэмбриологу, к. I. Балезину, а также к. Я.Е. Казакову за предоставленные образцы биологических объектов и данные о клиническом заключении. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, шести глав, обсуждения результатов, выводов, списка литературы из 1 наименования и приложений. Содержит 1 страницы, таблиц, рисунков, 2 приложения. Во Введении обоснована актуальность темы исследования, сформулированы цели и задачи, определены научная новизна, практическая значимость и положения, выносимые на защиту. В Литературном обзоре глава 1 рассмотрены механизмы возникновения окислительного стресса, его роль в патогенезе различных заболеваний и основные методы оценки окислительного сгресса, такие как методы определения радикальной активности, продуктов окисления биомолекул и определение антиоксидантной активности как ферментативных, так и неферментативных антиоксидантов. Глава 3 посвящена исследованию взаимодействия медиаторной системы с цельной кровью и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями, разработке алгоритмов определения АО А этих жидкостей. Глава 4 посвящена исследованию взаимодействия медиаторной системы с пероксидными радикалами и разработке потенциометрического метода определения АОА с использованием радикального инициатора. Обосновано использование последнего в анализе биологических объектов.